文章目录

1 材料与方法

1.1 材料

    1.1.1 组织、病毒及细胞

    1.1.2 主要试剂

    1.1.3 主要仪器

1.2 方法

    1.2.1 引物合成

    1.2.2 水牛脾淋巴细胞培养

    1.2.3 RNA的抽提与IL-2编码区基因的扩增

    1.2.4 表达载体的构建

    1.2.5 目的蛋白诱导表达与可溶性分析

    1.2.6 重组IL-2蛋白的纯化

    1.2.7 重组蛋白Western blot鉴定

    1.2.8 IL-2抗病毒活性分析

2 结果

2.1 水牛IL-2基因的扩增及克隆产物的鉴定

2.2 表达载体的构建

2.3 水牛IL-2蛋白的诱导表达与表达形式分析

2.4 IL-2蛋白的纯化

2.5 重组蛋白Western blot鉴定

2.6 重组蛋白的抗病毒活性分析

3 讨论

文章摘要:旨在制备高纯度水牛白细胞介素2（lnterleukin, IL-2）蛋白,为研发新型抗病毒药物奠定基础。通过刀豆蛋白A（concanavalin A,ConA）刺激水牛脾脏淋巴细胞,提取细胞总RNA,利用RT-PCR扩增IL-2基因编码区序列,与表达载体pET-32a连接,构建重组表达质粒pET-32a-IL-2,转入大肠埃希氏菌BL21中,用IPTG诱导目的蛋白表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析、纯化、Western blot鉴定及抗病毒活性评估。结果显示,水牛IL-2编码区序列全长468 bp,共编码155个氨基酸。重组IL-2蛋白主要以可溶性形式表达,表达的IL-2蛋白能与His标记抗体和山羊IL-2多克隆抗体反应,且在牛肾细胞上能有效抑制牛病毒性腹泻病毒引起的细胞病变,具有一定的抗病毒效果。结果表明,重组水牛IL-2蛋白在大肠埃希氏菌中表达量大、纯度高,反应性好,具有较强的抗病毒活性,可作为新型抗病毒药物的候选制品。

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