文章摘要:【目的】水稻OsFAD2编码脂肪酸脱饱和酶，调节油酸（C18:1）向亚油酸转化（C18:2），该基因突变后可提高水稻的油酸含量。为了创制高油酸水稻突变体并助力稻米油发展，利用CRISPR/Cas9技术对OsFAD2进行定点编辑。【方法】以日本晴（粳稻）愈伤组织为材料，利用含有CRISPR/Cas9-FAD2-sgRNA载体的农杆菌介导获得转基因植株，Sanger测序与荧光定量PCR鉴定阳性植株，最后利用气相色谱质谱（GC-MS）检测稻米籽粒脂肪酸含量变化。【结果】靶点序列测序检测表明，有3株OsFAD2敲除植株在T0代产生了碱基变异，但是仅有1株不存在脱靶现象。随后阳性植株种子被扩繁至T1代，使得OsFAD2突变序列纯和、稳定，荧光定量PCR检测表明OsFAD2表达量比野生型植株减少了约4倍。利用T1代转基因植株进行种子脂肪酸组分检测表明，敲除OsFAD2导致籽粒油酸含量显著上升了约30%。【结论】利用CRISPR/Cas9技术对水稻OsFAD2编码区序列进行靶向敲除并获得了高油酸水稻突变体，为后续高油酸稻米育种提供种质资源。

文章关键词:

论文分类号:S511

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